生物学论文_ICP34.5蛋白增强重组Ⅱ型单纯疱疹

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摘要：文章目录 缩略词表 摘要 Abstract 前言 1.实验材料 1.1 材料 2.实验方法 2.1 构建重组质粒 2.2 构建稳定表达ICP34.5 基因的Vero细胞系和BHK细胞系 2.3 稳定表达ICP34.5 细胞系生产o HSV2病毒并检测病

文章目录

缩略词表

摘要

Abstract

前言

1.实验材料

1.1 材料

2.实验方法

2.1 构建重组质粒

2.2 构建稳定表达ICP34.5 基因的Vero细胞系和BHK细胞系

2.3 稳定表达ICP34.5 细胞系生产o HSV2病毒并检测病毒滴度

3.实验结果

3.1 重组质粒酶切鉴定及质粒浓度测定

3.2 稳定表达ICP34.5 细胞系的扩大培养

3.3 PCR鉴定稳定表达ICP34.5 的Vero细胞系和BHK细胞系

3.4 q PCR鉴定稳定表达ICP34.5 基因的Vero细胞系和BHK细胞系

3.5 Western Blot检测ICP34.5 融合蛋白表达

3.6 稳定表达ICP34.5 细胞系生产o HSV2病毒并检测病毒滴度

4.讨论

结论

参考文献

文献综述

参考文献

攻读期间取得的学术研究成果

致谢

文章摘要:目的:通过建立稳转细胞系,探究Ⅰ型（HSV1）和Ⅱ型（HSV2）基因产物对重组Ⅱ型单纯疱疹病毒（o HSV2）复制的影响。方法:合成HSV1-ICP34.5和HSV2-ICP34.5基因序列,连接至Piggy Bac-Dual-promoter（PBDP）真核表达载体上,并通过测序进行确认。将重组真核表达载体转染到Vero细胞和BHK细胞,构建表达ICP34.5基因的稳转细胞系。用荧光显微镜及流式细胞仪检测绿色荧光蛋白（GFP,为稳转成功指示蛋白）的表达,用PCR扩增、实时荧光定量PCR及免疫印染来鉴定ICP34.5目的基因及表达。再用稳转细胞系来生产o HSV2病毒,通过CCID50方法检测病毒滴度来评估ICP34.5蛋白对o HSV2复制的影响。结果:共获得4种稳转细胞系,分别为VeroHSV1-ICP34.5、VeroHSV2-ICP34.5、BHKHSV1-ICP34.5和BHKHSV2-ICP34.5;4种新稳转细胞系于荧光显微镜下均能观察到绿色荧光蛋白（GFP）的表达,流式检测阳性细胞比例达到百分之九十以上;4种新稳转细胞系经免疫印染检测均能表达ICP34.5蛋白,用PCR扩增和荧光定量PCR都能鉴定出ICP34.5基因;病毒生产及滴度结果显示,VeroHSV1-ICP34.5、BHKHSV1-ICP34.5和BHKHSV2-ICP34.5三种细胞和对照细胞比较,均能促进o HSV2的复制,提高病毒的滴度,统计学分析有显著性差异（P值分别为0.0109、0.0484、0.0125）,而VeroHSV2-ICP34.5与对照细胞比较有促进o HSV2病毒复制的趋势,但统计学分析无显著性差异（P值为0.1506）。结论:成功构建稳定表达ICP34.5基因的新细胞系（Vero HSV1-ICP34.5细胞、Vero HSV2-ICP34.5细胞、BHKHSV1-ICP34.5细胞和BHKHSV2-ICP34.5细胞）;ICP34.5蛋白可增强重组Ⅱ型单纯疱疹病毒（o HSV2）复制,提高o HSV2病毒滴度。

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论文DOI:10.27862/d.cnki.ghkxy.2020.000021

论文分类号:R373

文章来源：《湖北科技学院学报》 网址: http://www.hbkjxyxb.cn/qikandaodu/2021/1110/734.html

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