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生物学论文_牛病毒性腹泻病毒N~(pro)基因克隆
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摘要：文章目录 1 材料与方法 1.1 病毒株、菌株、细胞及质粒 1.2 实验动物 1.3 主要试剂及仪器 1.4 引物设计及合成 1.5 Npro基因的扩增 1.6 重组克隆质粒p MD-18T-Npro的构建 1.7 Npro基因进化树的构建
文章目录
1 材料与方法
1.1 病毒株、菌株、细胞及质粒
1.2 实验动物
1.3 主要试剂及仪器
1.4 引物设计及合成
1.5 Npro基因的扩增
1.6 重组克隆质粒p MD-18T-Npro的构建
1.7 Npro基因进化树的构建及生物信息学分析
1.8 重组原核表达质粒的构建
1.9 Npro蛋白的表达及可溶性分析
1.1 0 重组蛋白的Western blot分析
1.11重组蛋白的纯化及多抗制备
1.12多克隆抗体效价的检测及其蛋白反应原性鉴定
1.13多克隆抗体的特异性鉴定
2 结果
2.1 Npro基因PCR扩增产物的鉴定
2.2 重组质粒p MD-18T-Npro的鉴定
2.3 Npro基因进化树的构建及结构预测
2.4 重组表达质粒p ET-28a-Npro的鉴定
2.5 表达产物的SDS-PAGE鉴定
2.6 表达产物的Western blot鉴定
2.7 纯化产物的SDS-PAGE鉴定
2.8 鼠抗Npro蛋白多克隆抗体效价
2.9 Npro蛋白的反应原性
2.1 0 鼠抗Npro多克隆抗体的特异性
3 讨论
文章摘要:目的研究牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea viruses,BVDV）N-端自身蛋白酶(Npro)的生物信息学特征及表达特性。方法克隆NADL株BVDV Npro基因,利用生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、疏水性、跨膜区、信号肽、二级及三级结构,并进行原核表达、纯化及鉴定。将纯化的重组Npro蛋白免疫昆明小鼠,制备鼠抗Npro蛋白多克隆抗体,采用ELISA法、间接免疫荧光试验及Western blot法进行多克隆抗体效价、特异性及蛋白反应原性检测。结果 PCR扩增的Npro基因全长504 bp,编码168个氨基酸,Npro基因与BVDV V026株属于同一分支。Npro蛋白属于外膜蛋白,有亲水性,无信号肽,二级结构以β折叠和无规则卷曲为主。重组表达质粒pET-28a-Npro经PCR及酶切鉴定正确,测序结果与原序列一致;表达的重组Npro蛋白相对分子质量约25 000,纯化后纯度达95%以上,且免疫原性良好;制备的鼠抗Npro蛋白多克隆抗体效价为1∶128 000,特异性良好。结论成功在大肠埃希菌中表达了BVDV Npro蛋白,表达的Npro蛋白免疫原性良好,为进一步研究BVDV Npro蛋白的功能奠定了基础。
文章关键词:牛病毒性腹泻病毒,Npro蛋白,原核表达,生物信息学分析,
项目基金:科技部十三五重点研发项目(2016YFD0500904),
论文作者:王丽1,2 马骏1,2 高丽1,2 赵童1,2 岳山1,2 刘宇1,2
作者单位:1. 黑龙江八一农垦大学动物科技学院 2. 黑龙江省牛病防控工程技术研究中心
论文DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.003414
论文分类号: S852.65
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文章来源：《湖北科技学院学报》 网址: http://www.hbkjxyxb.cn/qikandaodu/2021/0818/667.html
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